Técnicas de coloración

Introducción

Existen dos tipos de colorantes según su origen: naturales y artificiales. Los colorantes naturales se obtienen de plantas e insectos, por ejemplo: hematoxilina, orceína, carmín. Los colorantes artificiales son sintetizados químicamente en el laboratorio, por ejemplo: la eosina.

Clasificación de los colorantes

Los colorantes se clasifican en catiónicos, aniónicos, neutros e indiferentes. En esta oportunidad nos referiremos sólo a los colorantes catiónicos y aniónicos.

Colorantes catiónicos: Colorean estructuras aniónicas del citoplasma de las células, estructuras extracelulares y núcleos. Ejemplos: Azul de Toluidina, Rojo Neutro, Verde de Etilo. Hematoxilina.

Colorantes aniónicos: Colorean compuestos citoplasmáticos y materiales proteícos extracelulares. Ejemplos: Eosina, Verde Luz, Azul de Anilina.

Conceptos:

  1. “Acidofilia” significa afinidad por los colorantes ácidos (aniónicos).
  2. “Basofilia” significa afinidad por los colorantes básicos (catiónicos).

Hematoxilina

La hematoxilina se obtiene del árbol Haematoxylon campechianum

La hematoxilina recién extraída del árbol no colorea, ni es un colorante. Para obtener un colorante a partir de la misma se debe oxidar a hemateína. Esta oxidación puede ser de modo natural proceso que también se denomina maduración, realizándose por la exposición al aire y a la luz; el otro modo de oxidación es química agregándose un agente oxidante a la solución. El resultado de la oxidación es la hemateína, el colorante. Normalmente se utiliza el término de hematoxilina para referirse al colorante y no hemateína.

Hematoxilina-Eosina (H-E)

Ovocito 
Tinción: Hematoxilina y eosina

La hematoxilina y eosina es la técnica de rutina en microscopía óptica.

La hematoxilina(hemateína) es un colorante catiónico. Colorea las estructuras ricas en componentes aniónicos (basófilas) las que adquieren una coloración azul o violeta.

Estructuras coloreadas con hematoxilina:

  • Núcleo
  • Nucleolo
  • Retículo endoplamático rugoso

La eosina es un colorante aniónico que colorea las estructuras catiónicas en tonos de rosa. Se colorea con eosina el citoplasma de las células.

Reacción del ácido peryódico de Schiff (PAS)

Célula caliciforme
Técnica: PAS

La técnica de PAS se utiliza para la demostración de glucógeno, mucopolisacáridos neutros, y la membrana basal que separa el epitelio del tejido conjuntivo, adquiriendo un color rojo oscuro o magenta. Las estructuras que se colorean con esta técnica se llaman PAS postivas. Ejemplo: la mucina que produce la célula caliciforme es PAS positiva.

Impregnación Argéntica

Métodos argénticos – Impregnaciones argénticas: Consisten en el depósito de sales metálicas (nitrato de plata, sales de cromo, etc) sobre las células y los tejidos. Ejemplos: Técnica de Wilder, Técnica de Gordon y Sweet. Se utilizan para evidencias fibras reticulares y estructuras nerviosas.

Las fibras reticulares son muy delgadas y no es posible observarlas con coloraciones de rutina por lo que se precisa de técnicas que las magnifiquen y engrosen para permitir su observación.

Fibras reticulares – Doble impregnación argéntica.

Orceína

Fibras elásticas. Orceína.

La orceína es un colorante natural extraído de Roccella tinctoria específico para fibras elásticas las que adquieren una coloración bordeau-marrón.

Azul de Toluidina

Metacromasia: cuando una estructura adquiere una coloración diferente a la del colorante empleado se denominan cromotrópas y los colorantes son metacromáticos. El azul de toluidina es un colorante catiónico y permite evidenciar a los mastocitos, células del tejido conjuntivo laxo que adquieren una coloración violeta o magenta, mientras que el resto de las estructuras toman una coloración en diferentes tonos de azul.

Mastocitos
Técnica: Azul de toluidina

Tricrómico Cajal Gallego

Métodos tricrómicos: Se usan para la demostración de fibras colágenas y músculo. Se utilizan tres colorantes, uno nuclear y dos citoplasmáticos o extracelulares ejemplos: Tricrómico de Van Gieson, Tricrómico Cajal Gallego, Tricrómicos de Masson.

Osificación endocondral
Técnica: Tricrómico Cajal Gallego

En el Tricrómico Cajal Gallego el colorante nuclear es la fuscina acética y como colorante citoplamático o extracelular el Picro Índigo Carmín, que consiste en varios colorantes.

Las estructuras adquieren las siguientes coloraciones:

  • Colágeno de azul
  • Músculo de verde
  • Citoplasma de amarillo
  • Mucus de rojo
  • Núcleo de verde

May Grunwald Gimesa

Frotis de sangre periférica enriquecida con leucocitos.
Técnica: May Grunwald Gimesa

Es la técnica de rutina para identificar los elementos formes de la sangre (eritrocitos, plaquetas y leucocitos). Esta técnica permite observar detalles citoplasmáticos y nucleares.

Bibliografía

  • Material del Ciclo Básico Clinico Comunitario (2017), Facultad de Medicina UdelaR.
  • Ross, M., (2007), Histología: Texto y atlas color con Biología Molecular Y Celular. Editorial Médica Panamericana.
  • Garcia del Moral, R. (1993). Laboratorio de Anatomía Patológica. McGraw Hill.
  • Geneser, F., Histología. Editorial Médica Panamericana. 3° edición.
  • Sanson, I., Introducción a las técnicas histopatológicas. Facultad de Medicina UdelaR.

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